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2024-08-3073次
導讀
近日，中南大學醫學遺傳學研究中心梁德生教授團隊在新型核酸檢測技術研究中取得新進展，題為“基于單鏈dna修飾的crrna和cas12a的快速、靈敏核酸檢測一步法（rapid and sensitive cas12a-based one-step nucleic acid detection with ssdna-modified crrna）”的最新研究成果在化學領域國際權威期刊《分析化學學報》（analytica chimica acta）上發表。中南大學碩士研究生曾欽龍和周妙金博士為該**的共同第一作者，梁德生教授、鄔玲仟教授和李卓副教授為共同通訊作者，中南大學生命科學學院為唯一作者單位。本研究受國家自然科學基金、國家重點研發等項目支持。
基于規律間隔成簇短回文重復序列（cr**pr）的核酸檢測技術在病原體檢測領域發展迅速，但由于等溫擴增（rpa）和cr**pr檢測的反應不兼容，該技術在檢測時需要兩步*作，即核酸擴增及隨后的cr**pr檢測。這種檢測方式不僅增加了*作的復雜性，而且可能導致污染的發生。此外，cr**pr核酸檢測技術使用的cr**pr rna（crrna）存在易降解的問題，在一定程度上限制了該技術的應用。針對這些問題，本研究開發了一種基于cripspr-cas12a的*作簡便、快速、靈敏度高的核酸檢測一步法（casdos）。
casdos檢測原理圖
研究人員通過對crrna兩端進行dna堿基修飾的方式，實現了rpa和cr**pr檢測在一步法反應中的兼容。研究發現，dna堿基修飾的crrna在一步法反應中的靈敏度提升了100-1000倍，其對病原體gbs、hpv16和hpv18的檢測限均達到了16.6am。此外，修飾的crrna在rnase r處理實驗中，也表現出了更好的耐受性。在臨床檢測中，casdos對已知基因型的hpv dna樣本的檢測準確率為100%，而且casdos對**或宮頸拭子樣本的檢測結果與qpcr結果也完全一致，該檢測結果可在30分鐘內獲得（從樣品處理到結果）。
該研究表明casdos具有*作簡便、快速、靈敏度高的特點，其在病原體的檢測領域，尤其是即時檢測（poct）上具有廣泛的臨床應用前景。
來源：中南大學
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